BeaverBeads? Protein A用于進(jìn)行免疫共沉淀和純化實(shí)驗(yàn)
該研究利用BeaverBeads? Protein A對(duì)MEL 624.38細(xì)胞的MHC I-短肽復(fù)合物進(jìn)行免疫共沉淀和純化實(shí)驗(yàn)，通過(guò)MHC I表征在MEL 624.38細(xì)胞上呈遞的肽并進(jìn)行MS分析，并對(duì)EA1和EA1 HL-vcMMAE的體外功效、TL-ADC的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性等進(jìn)行測(cè)定，研究結(jié)果驗(yàn)證了使用分選酶A產(chǎn)生的TL-ADC靶向腫瘤特異性細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的策略，無(wú)論是否存在藥物，都可以增加現(xiàn)有的TCR表位多肽。
浙江大學(xué)藥學(xué)院陳樞青教授等在出版于Biomaterials?8.806的利用sortase a產(chǎn)生的靶向細(xì)胞內(nèi)黑色素瘤抗原MART-1的tcr樣抗體-藥物偶聯(lián)物(TL-ADCs)消除黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)：
HLA I（人類白細(xì)胞抗原 I）可以呈遞細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)蛋白的肽和細(xì)胞表面上的體細(xì)胞突變蛋白，形成HLA –短肽復(fù)合物作為T細(xì)胞受體識(shí)別的腫瘤特異性抗原。因此，，HLA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)腫瘤抗原肽的呈遞提供了區(qū)分腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的可行方式。這對(duì)于拓展抗原選擇，尤其是對(duì)高細(xì)胞毒性的抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）具有重要的意義。
MART-1蛋白，是一種特異性識(shí)別轉(zhuǎn)移性黑素瘤的黑色素細(xì)胞分化抗原，該研究應(yīng)用分選酶A介導(dǎo)的綴合，開(kāi)發(fā)了靶向細(xì)胞內(nèi)MART-1的類T細(xì)胞受體藥物偶聯(lián)物（TL-ADC）EA1 HL-vcMMAE。TL-ADC能夠通過(guò)特異性識(shí)別由MHC I-短肽復(fù)合物貢獻(xiàn)的構(gòu)象表位來(lái)模擬TCR結(jié)合。因此，TL-ADC可以通過(guò)在與MHC I-短肽復(fù)合物結(jié)合時(shí)遞送高毒性試劑（例如MMAE）而特異性殺死靶向腫瘤細(xì)胞。
該研究利用BeaverBeadsTM protein A對(duì)MEL 624.38細(xì)胞的MHC I-短肽復(fù)合物進(jìn)行免疫共沉淀和純化實(shí)驗(yàn)，通過(guò)MHC I表征在MEL 624.38細(xì)胞上呈遞的肽并進(jìn)行MS分析，并對(duì)EA1和EA1 HL-vcMMAE的體外功效、TL-ADC的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性等進(jìn)行測(cè)定，研究結(jié)果驗(yàn)證了使用分選酶A產(chǎn)生的TL-ADC靶向腫瘤特異性細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的策略，無(wú)論是否存在藥物，都可以增加現(xiàn)有的TCR表位多肽。
圖 純化后的MEL 624.38黑素瘤細(xì)胞的HLA-A2呈遞的肽和合成的MART-126-35 MS光譜比較
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