應(yīng)用方向

BeaverBeads? IDA-Nickel Kit（Cat. 70501-K10)用于純化帶有his標(biāo)簽的PtuA和PtuB蛋白，證實(shí)PtuA和PtuB可形成異源寡聚體復(fù)合物，揭示了新型抗噬菌體防御系統(tǒng)Septu的分子組裝與抗噬菌體機(jī)制研究。

論文解析

       四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室余雅梅副研究員/陳強(qiáng)研究員團(tuán)隊(duì)在《Nature Structural & Molecular Biology》(IF: 16.8)上發(fā)表論文“PtuA and PtuB assemble into an inflammasome-like oligomer for anti-phage defense”。文章揭示了Septu系統(tǒng)的兩個組件PtuA和PtuB可以組裝成類似炎性小體的寡聚體復(fù)合物，PtuA有ATP酶結(jié)構(gòu)域，PtuB有核酸酶活性，該復(fù)合物可以大量切割噬菌體的核酸，影響噬菌體的復(fù)制。

       研究人員在大腸桿菌BL21(DE3)中共表達(dá)了PtuA和PtuB（C端帶有His標(biāo)簽），利用BeaverBeads? IDA-Nickel Kit（Cat. 70501-K10)純化出PtuB蛋白。SDS-PAGE膠檢測結(jié)果顯示PtuA和PtuB可形成穩(wěn)定復(fù)合物。并且，原位質(zhì)譜分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PtuA和PtuB可形成6：2分子比的異源寡聚體復(fù)合物，通過切割噬菌體基因組DNA來限制噬菌體的生長。

圖1.PtuA和PtuB復(fù)合物冷凍電鏡結(jié)構(gòu)模式圖

圖2.PtuA和PtuB復(fù)合物SDS-PAGE跑膠圖

該研究以PtuA和PtuA-PtuB復(fù)合物的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，結(jié)合體內(nèi)活性和蛋白質(zhì)功能研究，完整闡釋了Septu系統(tǒng)抵抗噬菌體感染的分子機(jī)制，并提出這一系統(tǒng)與哺乳動物免疫系統(tǒng)中的NLRC4炎癥小體的作用機(jī)制類似，這暗示著哺乳動物免疫系統(tǒng)相關(guān)蛋白可能起源于細(xì)菌的抗噬菌體防御系統(tǒng)。

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